Il 7 dicembre del 1941, gli Stati Uniti d’America entrarono ufficialmente nella seconda guerra mondiale, questo provocò un forte calo dei viaggi di piacere sulla Route 66. Pneumatici e benzina furono razionati, ma la Mother Road fu considerata vitale per la difesa nazionale e l’ampliamento delle quattro corsie tra Missouri e Illinois proseguì senza rallentamenti.
La Route 66 collegava i centri industriali e le installazioni militari come Ft. Leonard Wood nel Missouri, Ft. Wingate Ordnance Depot nel New Mexico, Navajo Ordnance Depot in Arizona e Edwards Air Force Base in California. Il Mojave attorno alla Route 66 in California divenne un vasto campo di addestramento per carri armati e unità di fanteria.